新型植物基因組 DNA 提取試劑盒

適用范圍: 

植物 DNA 提取

試劑盒組分：

Buffer FA 80ml

Buffer FB 28ml

Buffer FC 100ml*2

Buffer GW 33ml*2

Buffer GE 20ml

Rnase A(10 mg/ml) 1.2ml

吸附柱 200 個(gè)

保存條件：

Buffer GE 4°C

Rnase A 4°C 

其它組分室溫保存

產(chǎn)品說明

本試劑盒采用高效、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和特*的緩沖系統(tǒng)，適合從各種不同的新鮮或凍存植物組織中提取基因組 DNA，并可最大限度去除植物組織中的雜質(zhì)。本試劑盒無需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因組 DNA 片段大、純度高、質(zhì)量穩(wěn)定可靠，適用于 PCR、熒光定量 PCR、分子標(biāo)記、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。

自備試劑：無水乙醇

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。

2．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在 Buffer GW 中加入無水乙醇。使用前請(qǐng)檢查 Buffer FA 和 Buffer FB 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將 BufferFA 和 Buffer FB 于 56℃水浴重新溶解。 

操作步驟

1．取植物新鮮組織 50-400mg 左右，加入液氮充分研磨。

2．將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中，加入 400ul Buffer FA 和 6ul Rnase A（10 mg/ml），渦旋振蕩 1 分鐘，室溫放置 10 分鐘，使其充分裂解。

注意：1）使用渦旋振蕩或移液器吹打，充分裂解組織，組織裂解不全會(huì)影響最終的 DNA 得率。

2）請(qǐng)勿在使用前將 Buffer FA 與 Rnase A 混合。

3．加入 130ul Buffer FB，混勻，渦旋震蕩 1 分鐘。

4．13,000×g 離心 3 分鐘，將上清移至新的離心管（自備）中。

5. 將上清液再次 14,000×g 離心 5 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管（自備）中。注意：此步驟目的為去除上清液中的沉淀雜質(zhì)，使提取基因組 DNA 純度更高。

6．加入 2 倍體積的 Buffer FC，充分混勻（如 450ul 濾液加入 900ul Buffer FC）。注意：加入 Buffer FC 后應(yīng)立即混勻，可能會(huì)產(chǎn)生沉淀但不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

7．將上步所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。13,000×g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8． 向吸附柱中加入 500ul Buffer GW（使用前檢查是否已加入無水乙醇），13,000×g離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。注意：如吸附膜呈現(xiàn)綠色，向吸附柱中加入 500ul 無水乙醇，13,000×g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．重復(fù)步驟 8。

10．13,000×g 離心 2 分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以晾干。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。

11. 將吸附柱放到一個(gè)新離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位懸空滴加入 50ulBuffer GE 或滅菌水，室溫放置 2-5 分鐘，13,000×g 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。注意：1）如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì) pH 值或 EDTA 敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH將水的 pH 值調(diào)到此范圍），pH 值低于 7.0 時(shí)洗脫效率不高。2）離心之前室溫孵育 5 分鐘可以增加產(chǎn)量。3）如果要提高 DNA 的終濃度，可以將步驟 10 所得的 DNA 洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟 10；

4）因?yàn)楸４嬖谒械腄NA會(huì)受到酸性水解作用的影響，如需長(zhǎng)期保存，推薦用Buffer GE 洗脫并于-20℃保存。 

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

上海牧榮生物科技有限公司

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