抗體或蛋白質(zhì)標(biāo)記是指將目標(biāo)物質(zhì)（酶、熒光素、生物素）與抗體或其他蛋白質(zhì)共價(jià)連接，并與生成測(cè)試物質(zhì)發(fā)生特異性反應(yīng)，形成多重復(fù)合物。借助熒光顯微鏡、射線測(cè)量?jī)x、酶標(biāo)檢測(cè)儀、電子顯微鏡、發(fā)光免疫分析儀等精密儀器，可通過(guò)顯微鏡直接觀察檢測(cè)結(jié)果或在細(xì)胞、亞細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)、分子水平上自動(dòng)測(cè)定檢測(cè)結(jié)果。對(duì)抗原和抗體反應(yīng)進(jìn)行定性和定位研究，或應(yīng)用各種液相和固相免疫分析方法定性和定量測(cè)定體液中的半抗原和抗原。現(xiàn)在，抗體標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)、生物制藥等領(lǐng)域的分析研究和技術(shù)測(cè)定。常見(jiàn)的抗體標(biāo)記技術(shù)包括酶標(biāo)記、生物素化標(biāo)記和熒光素標(biāo)記。

常用的抗體/蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)

1. 酶標(biāo)記

通過(guò)合適的方法將酶與抗體或蛋白質(zhì)共價(jià)鍵合，制成酶標(biāo)記抗體。然后，通過(guò)酶對(duì)底物的特異催化作用，生成有色不相容產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒。這些有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察。也可以用分光光度計(jì)來(lái)測(cè)量。顏色反應(yīng)表明酶的存在，證明相應(yīng)的免疫反應(yīng)已經(jīng)發(fā)生。

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)綴合通常使用雙功能接頭交聯(lián)劑進(jìn)行。交聯(lián)劑（NHS酯）的一端與氨基酸賴氨酸和N端的胺（-NH2）反應(yīng)，另一端（馬來(lái)酰亞胺胺）與硫醇基（-SH）反應(yīng)存在于氨基酸中。然而，SMCC 修飾的蛋白質(zhì)極其不穩(wěn)定，并且通常會(huì)發(fā)生自身反應(yīng)。

2. 生物素標(biāo)記

親和素和生物素可以與蛋白質(zhì)（抗原、抗體、酶）、熒光劑和其他分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。是一種理想的標(biāo)記劑。一個(gè)抗體分子可與數(shù)十個(gè)生物素或親和素分子偶聯(lián)，親和素或生物素分子可與酶或熒光素結(jié)合形成生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測(cè)的靈敏度。常用的有親和素-生物素標(biāo)記法、親和素-生物素橋法、親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法。

3. 熒光標(biāo)記

染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合需要染料與蛋白質(zhì)之間形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，并且這種共價(jià)鍵在大多數(shù)情況下都不能斷裂。與蛋白質(zhì)固有的熒光相比，小型有機(jī)染料在選擇標(biāo)記位點(diǎn)和增強(qiáng)熒光方面具有更大的靈活性，已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)標(biāo)記。用適當(dāng)?shù)?/span>熒光染料標(biāo)記后，蛋白質(zhì)可以在各種生物過(guò)程中可視化，以便可以在生化測(cè)定中量化或定位在細(xì)胞研究中心。染料-蛋白質(zhì)綴合物已成為研究酶活性、蛋白質(zhì)相互作用、構(gòu)象變化以及調(diào)節(jié)和觀察特定生物過(guò)程的非常重要的工具。它們已廣泛應(yīng)用于 ELISA、蛋白質(zhì)印跡、流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞成像。